Angiotensin-degrading serine peptidase: a new chymotrypsin-like activity in the venom of Bothrops jararaca partially blocked by the commercial antivenom.

Snakebite envenomation is considered a highly relevant public health hazard in South America, having an impact in terms of mortality and morbidity. In Brazil, Bothrops (sensu latu) poisoning is responsible for 90% of the snakebites and in patients treated at the Vital Brazil Hospital (Butantan Institute) this index reaches 97.5%. The objective of the present study was to analyze more specifically the ability of the antibothropic antivenom, produced by the Butantan Institute, São Paulo, Brazil, to neutralize metallo-and serine peptidases, known as the major toxins present in Bothrops jararaca venom. A set of Fret peptides (Free Ressonance Energy Transfer) was studied using the BjV (B. jararaca venom) and site-directed inhibitors PMSF, EDTA and 1,10-phenanthroline. Two substrates were reached to be used as specific tools for studies with metallo peptidases, Abz-FASSAQ-EDDnp, and the serine peptidases, Abz-RPPGFSPFRQ-EDDnp. In disagreement with the literature, the use of both substrates and the antibothropic serum showed a weak neutralization of the serine peptidases present in this venom and a strong neutralization of the metallo peptidases. In order to investigate possible mechanisms of action that have not yet been described for the serine peptidases from the BjV, the present study shows for the first time a new tyrosine-specific chymotrypsin-like and angiotensin-degrading serine peptidase activity, that was partially blocked by the antibothropic serum. In conclusion, the antivenom presented a good neutralization of metallo peptidases but not of serine peptidases, indicating that further studies about serine peptidases immunogenicity are necessary to improve the antibothropic serum.

Uso de peptídeos sintéticos para a dosagem de enzimas clinicamente importante / Use of synthetic peptideos for determination of clinically important enzymes

O trabalho aqui apresentado representa a consolidação das nossas atividades de pesquisa desenvolvidas entre 1993 e 2001 sobre síntese de peptídeos e estudo de especificidade de proteases. Durante este período instalamos e desenvolvemos metodologias modernas de síntese de peptídeos em fase sólida usando a estratégia Fmoc partindo de uma infra-estrutura que vinhamos estabelecendo desde 1980 para síntese de peptídeos em solução, voltada principalmente para o estudo de substratos e inibidores de proteases. Assim, pudemos desenvolver os seguintes temas:ò Síntese de substratos cromogênicos.ò Síntese de substratos fluorogênicos.ò Síntese de substratos de fluorescência apagada internamente.ò Síntese paralela de peptídeos em fase sólida.ò Síntese de biblioteca de peptídeos.O desenvolvimento de compostos químicos com atividades biológicas, seja mimetizando compostos naturais, seja inibindo suas atividades é o objetivo básico da área de conhecimento denominada Química Farmacêutica ou também Química Médica na língua inglesa (Medicina/ Chemistry). Esta tem sido ao longo do tempo uma ciência empírica na sua essência, embora tenha se tornado bastante sofisticada nas últimas duas décadas. Sínteses orgânicas, biotecnologia, ensaios biológicos elegantes e modelagem por computador são algumas das poderosas técnicas empregadas e que trazem elementos racionais para a pesquisa de novas drogas. O paradigma da Química Médica é descobrir compostos com atividades biológicas desejáveis, uma de cada vez, e a partir destes (compostos líderes) desenhar e ensaiar outros mais potentes e com menor toxicidade. O desenvolvimento da síntese de peptídeos propiciou avanços fundamentais nesta área.